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台灣默克產品專員 Amy Lin

研討會精彩回顧
研討會精選 Q&A

A1:PVDF使用前需在醇類溶液中浸泡,以活化膜上的正電基團,使其更容易與帶負電荷蛋白結合。只要是醇類溶液皆可使用,如:>50% v/v的甲醇、乙醇、異丙醇。參考資料:Immobilon®-P Transfer Membrane User Guide第2頁。

A3:一般而言,NC膜換成PVDF膜後,背景值通常會變低,原因是PVDF膜對蛋白質以外的物質親和力極低。假如您持續遇到背景值的問題,歡迎您提供實驗條件與我們進一步討論,讓我們協助您找出改善的方式。

A4:建議使用>50% v/v的甲醇、乙醇或異丙醇,浸泡10–20秒,或浸泡至膜從不透明白色轉變為半透明灰色。

參考資料:Immobilon®-P Transfer Membrane User Guide第4頁。

A5:建議使用>50% v/v的甲醇、乙醇或異丙醇,浸泡10–20秒,或浸泡至膜從不透明白色轉變為半透明灰色。

甲醇濃度若太低、浸泡時間不足,可能導致預潤濕不完全,會影響蛋白質吸附在膜上的能力。

參考資料:Immobilon®-P Transfer Membrane User Guide第4頁。

A6:在WB慣行方式下,通常在跑完電泳後,用戶即會將凝膠組裝為轉漬三明治、進行轉漬,通常組裝時間不會超過15分鐘。我們建議用戶可以在進行轉漬之前,先在transfer buffer中預先平衡您的凝膠,建議浸泡時間15分鐘,在此條件下可以最佳化地讓凝膠中的SDS被預先去除,後續讓蛋白更好地結合到膜上。

A7:聚丙烯醯胺凝膠電泳(Polyacrylamide gel electrophoresis, PAGE)使用不連續緩衝系統,在凝膠中的緩衝離子與跑膠緩衝液中的離子不同,這兩種離子之間的「電泳移動率」的差異形成了蛋白質穿過的移動電壓梯度。因為MOPS running buffer和MES running buffer中所含之離子不同,因此可以達成不同的分離效果。

A8:購買Immobilon® NOW預先裁切轉漬膜,凡有WB會員身份者即加贈「WB必備滾輪」。「WB必備滾輪」也可以單獨購買,其貨號為SNAP2RL,歡迎與我們聯繫取得報價。(下方為使用示意圖,貨號SNAP2RL不含墊板)

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