Q1:胺基酸合成/胜肽合成和一般的化學合成沒有太大差別,為了節省時間及成本可以到最後再進行純化就好了!

  • A1:不行喔!胜肽合成的特點是其副產物(合成序列錯誤的胜肽)分離鑑定非常困難,甚至在 HPLC 上也未必能顯示出可辨別的不同波峰,

    且胜肽分子具有熱穩定性不佳,對 pH 值變化敏感,容易氧化(序列含 Cys, Met)等特點,若原料品質不佳,而造成產物的低產率及低純度,

    不但影響後續生物活性測試的準確性,而且純化的難度會佔用研究人員大量的人力、時間及金錢,所造成的損失可能是您當初沒有估算到的。

Q2:胺基酸的規格(Specification)只要看純度就可以了嗎?

  • A2:這樣還不夠喔!純度只是最基本的要求,但胺基酸原料仍有其他重要因素會影響合成胜肽時的效果。

    例如二胜肽(Dipeptides),游離胺基酸(Free amino acid),鏡像物純度(Enantiomeric purity),

    乙酸乙酯(Ethyl acetate),醋酸根(Acetate)殘留量等,都會影響到胜肽合成的結果,特別是當合成序列較長的胜肽時,影響會更加顯著。

例如:鏡像異構物(enantiomers)

  • 一般HPLC管柱是無法分離D-胺基酸和L-胺基酸的, 因此少量的鏡像不純物很容易被忽略掉,造成最終產物純度不佳,但使用者卻找不出問題在哪裡的窘境。(表一)

    Effect of Amino acid enantiomeric purity on peptide purity

 (表一) 鏡像異構物含量對胜肽純度的影響。

L-content 99.5% L-content 99.8%
20mer 90% 96%
40mer 82% 92%
60mer 74% 89%

例如:醋酸根及乙酸乙酯(aetate & ethyl acetate)

  • Fmoc-氨基酸可能含有微量乙酸,會在合成過程中導致進行偶合時,因胺基酸連接上醋酸根導致胜肽鏈異常終止(capping)。

    Novabiochem®規範產品的醋酸含量≤0.02%,且可產生醋酸根的乙酸乙酯規範為≤ 0.5%。(圖一及圖二所示)

(圖一) 醋酸根對胜肽合成的影響:增加不完全合成的胜肽片段。

(圖二) 乙酸乙酯產生醋酸根。

更詳細的說明請見我們的型錄

Q3:我應該選用哪種樹酯來進行固相胜肽合成(SPPS)呢?

A3:一般胜肽合成會由N端來延伸肽鏈。若是目標胜肽末端(C 端)為羧酸(carboxylic acid)可選用最常用的 Wang resin;

若是末端(C 端)為醯胺(amide)的胜肽,則可以選擇 Rink Amide AM Resin 或 Rink Amide MBHA Resin; 此外2-Cl Trt Resin也很常被用來合成胜肽片段。

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