【特殊應用分享】用 Scepter 3.0 分析周邊血液單核球 PBMC

5 月【默克新星探險報】

「原來現在已經有這麼適合我們的儀器,我之前怎麼都不知道!」這是我們最常聽到客戶說的話。默克新星探險報,網羅現在 Merck 六大品牌在各大領域當中的特殊應用,希望相同領域的您,也能發現新可能。

周邊血液單核球 PBMC

大多數生物樣品或培養的細胞,都是不同類型、功能或健康狀況的細胞異質混合物。在普遍情況下,樣本中的細胞類型或狀態可能不同,因此可以僅透過細胞大小來區分,例如 PBMC 若依細胞大小分群,可區分為活細胞(多種細胞)、死細胞和碎片。裏頭活細胞又包含兩種不同大小的群體,較大的為單核球細胞(M),較小的一群為淋巴細胞(L) -包括 T-cell, B-cell 及 NK-cell。

whole-cell-lysis

本期主角:手持細胞計數器 Scepter™ 3.0

Scepter™ 感測器藉由測量單個細胞之電阻值,以輸出細胞體積、細胞直徑和細胞濃度──且所有這些資訊可在細胞培養無菌工作臺內輕鬆獲得。

認識 Scepter 3.0

定量 PBMC 中單核球細胞及淋巴細胞,方法比一比

(D : 死細胞或碎片; L: Lymphocyte ; M : Monocyte)

肉眼看,使用流式細胞儀得到的結果,和 Scepter 3.0 就很接近了;但數據上也是嗎?

使用Scepter 3.0 手持細胞計數系統,透過 gating 功能算出的各群數量,與流式細胞儀相比,兩者計數出的 Total PBMC 和 lymphocyte 數量大致相同,但 Scepter 3.0 無需染色、等候上機,且計數僅需 30 秒可得到結果。

與流式細胞儀相比,兩者計數出的total PBMC和 lymphocyte數量大致相同

定量 PBMC 中被活化之淋巴細胞

免疫細胞被刺激活化會經歷許多物理和功能變化,包括細胞體積增大、細胞因子分泌以及呈現表面標誌物(如 CD69 和 CD25)。
為確認 Scepter 3.0 細胞計數器,能以細胞大小變化來快速定性監測免疫細胞活化的潛在用途,我們使用兩種不同的機制來刺激 PBMC:

(1) CD3/CD28 抗體的共刺激T 細胞受體
(2) PHA 刺激有絲分裂

定量PBMC 中被活化之淋巴細胞

加入PHA或CD3/CD28共刺激後,可看到免疫細胞直徑peak,與Untreated組別相比往右shift,表示細胞體積有變大趨勢。但刺激除了導致的細胞大小變化外,還會使活化的細胞快速增殖,和讓無反應的細胞死亡。

Scepter 3.0 細胞計數儀基於細胞大小的分析方法,在定量上能判斷免疫細胞是否有被活化,更細部的分析可進一步使用表面 marker 標定。

你的實驗也有 Gating 細胞的需求嗎? 你也想要在 Bench 一站分析細胞嗎?

立即申請試用!(7天免費體驗)